公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

     b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

H1299人非小細胞肺癌細胞 H1299 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS 大鼠雙調(diào)蛋白(AREG)ELISA試劑盒 5-NT(Mouse 5-Nucleotidase)  小鼠5核苷酸酶 96T

NESG1： 鼻咽上皮細胞特異性蛋白1抗體 GFRA1 Others Mouse 小鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0015A-431(人表皮癌細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠雙腎上腺皮質(zhì)激素(DCX)ELISA試劑盒 bFGF-6(Human basic fibroblast growth factor 6)  人堿性成纖維細胞生長因子6 96T

NR2F2： 載脂蛋白AI調(diào)節(jié)蛋白1抗體 大鼠胚胎心肌細胞;H9c2(2-1)

SK-N-MC(人神經(jīng)上皮瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 HEL(紅白血病細胞) 大鼠雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒 CD19(Rat Troponin T)  小鼠CD19分子 96T

IL-3： 白介素3抗體 CD200R4 Others Mouse 小鼠 CD200R4 / CD200 Receptor 4 / CD200RLa 人細胞裂解液 (陽性對照)

人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100] 人β2受體抗體(β2-AR)ELISA試劑盒 RhoA (RhoA protein) RhoA抗原 0.5mg

IDI1： 異戊烯焦0酸1抗體 人急性淋巴母細胞性白血病細胞;MOLT-4

Sf-21(昆蟲細胞) 5×106cells/瓶×2 人 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 人β1受體抗體(β1-AR)ELISA試劑盒 Rho C(Ras homolog gene family member C) RhoC抗原 0.5mg

phospho-IRS1(Ser789)： 0酸化胰島素受體底物-1抗體 心肌細胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml)

MOLT-4人急性淋巴母細胞白血病細胞RNF13： 環(huán)指蛋白13抗體 EFNB2 Others Canine 狗 Ephrin-B2 / EFNB2 人細胞裂解液 (陽性對照)

3T3A31 小鼠胚胎成纖維細胞 大鼠半胱酸抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒 GCK(Human glucokinase)  人葡萄糖激酶 96T

RNF15： 環(huán)指蛋白15抗體 THP 1細胞，單核細胞型淋巴瘤細胞 人前列腺癌細胞高轉(zhuǎn)移亞系,PC-3M 2B4細胞 人結(jié)膜成纖維細胞總RNAHConF NA

IL1R1 Others Rat 大鼠 IL1R1 / CD121a 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠半胱酸抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA 試劑盒 MAO(Human monoamine oxidase)  人單胺氧化酶 96T

RECK： 金屬抑制因子RECK抗體 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1